Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у животных (14830)

Посмотреть архив целиком

Министерство сельского хозяйства Российской Федерации

Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия







Кафедра физиологии сельскохозяйственных животных и зоологии













Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у животных



















Ульяновск, 2005 г.



УДК


Н.А.Любин, Л.Б.Конова.

Методические рекомендации к определению и выведению гемограммы у сельскохозяйственных и лабораторных животных при патологиях.

Для студентов и аспирантов факультетов ветеринарной медицины и технологического. Ульяновск, ГСХА, 2005, с.








При подготовке настоящих рекомендаций был использован опыт работы…













РЕЦЕНЗЕНТ: В.А.Ермолаев, доктор ветеринарных наук, профессор


Рекомендовано к изданию

методической комиссией

факультета ветеринарной медицины

Протокол № от 2005 г.




Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия, 2005 г


МЕТОДИКА ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКОВ КРОВИ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ


А. ВЗЯТИЕ КРОВИ И ПОЛУЧЕНИЕ МАЗКА


Циркулирующая в сосудистой системе кровь представляет более или менее равномерную взвесь в плазме форменных элементов: эритроцитов, лейко­цитов и кровяных пластинок (у птиц, рептилий и амфибий — тромбоцитов). Абсолютное количество и соотношение отдельных групп клеток в крови раз­личных видов животных неодинаковы. Наибольшие колебания дают эритроциты: от 3,5 млн. в 1 мм 3 крови кур до 14,4 млн. в том же объёме крови коз. Несколько меньше видовые колеба­ния количества белых кровяных телец: в 1 мм 3 крови млекопитающих содержится от 5 до 15 тыс. лейкоцитов. Количество лейкоцитов в крови птиц значительно выше: у кур, например оно, доходит до 35 тыс., а у гусей до 38 тыс. в 1 мм 3. Наконец, со­держание кровяных пластинок в 1 мм3 крови колеблется от 200 до 400 тыс.

В крови, взятой из различных участков сосуди­стой системы, находится далеко не одина- ковое коли­чество кровяных телец, особенно, и это наиболее важно, лейкоцитов. Значительно колеблется при этом и соотношение отдельных форм белой крови (табл.1,2).

Таблица1

Количество лейкоцитов в различных участках кровяного русла у кроликов


Название органа или сосуда, ткани

%

Название органа или сосуда, ткани

%

Паренхима печени

83,9

Лёгкие .

74,4

Паренхима селезенки

385, 3

Vena. Pulmon.

43,9

Почки

103,8

Мышцы сердца

61,7

Надпочечники

73,8

Костный мозг

128,29

Vena mesent.

89,0

Vena. femoralis

62,4

Art. mesent.

84,4

Аrt . femoralis

69,9

Vena cava caud.

4.9

Vena. renalis

60,5

Если принять среднее количество лейкоцитов в 1 мм3 крови из ушной вены за 100%, то в крови из сосудов дру­гих органов содержится:


Поэтому важно брать кровь для анализа всегда из одного и того же сосуда или группы сосудов. У всех сельскохозяйственных млекопитающих таким местом являются вены уха, у кур — гребень, у уток и гусей — мякоть ступни ноги.


Таблица 2 Состав белой крови свиней


Кровь

Базофилы

Эозино-филы

Нейтрофилы

Лимфо-циты

Моноциты

Юные

Палочко

ядерные.

Сегменто

ядерные.

Из вены уха


0,5


2,5


1,0


5,5


31,5


55,5


3,5



Из сердца


до 0,1


0,4


1,0


10,0


62,0


24,5


4,0


Количество лейкоцитов зависит и от физиологи­ческого состояния животного.

У многих сельскохозяйственных и лабораторных животных заметно выражены пищеварительный лей­коцитоз (особенно у собаки), менее у лошади, и коле­бания количества лейкоцитов и (особенно) эритро­цитов при мышечной работе. При некоторых патологических состояниях имеет место ретенция белых кровяных телец в сосудах пе­чени и надпочечника. Лейкоцитоз наблюдается также во второй половине беременности.

Место взятия крови тщательно выстригается и если нужно, промывается водой с мылом, затем спир­том (или спиртом с эфиром). Рекомендуется тщатель­но растирать место взятия крови ваткой со спиртом и эфиром, что вызывает местную гиперемию и вместе с тем помогает избежать случайных колебаний лей­коцитарной формулы, связанных с некоторым застоем крови в мелких венах уха. Особенно следует иметь в виду возможное избирательное скопление в них эозинофилов.

Хорошие мазки крови можно получить только на очень чистых, обезжиренных предметных стёклах, тщательно промытых сначала горячей водой с мылом, а затем, после высушивания, — спиртом с эфиром. Промывание в спирте с эфиром особенно важно для полного обезжиривания стёкол. Если используются уже бывшие в употреблении стёкла, то их необходи­мо предварительно прокипятить в воде с содой.

Прокол тканей для получения крови лучше всего производить иглой Франка, но можно употреблять и обыкновенную иглу или специальное перо для уколов.

Первую выступившую на поверхность каплю крови быстро и тщательно стирают с места укола, а из вто­рой и последующих приготовляют мазки.

Приготовление мазка крови. Чистое предметное стекло держат, как показано на рисунке 1, между большим и средним пальцами левой руки. В правой руке, теми же или большим и указательным пальца­ми держат чистое покровное или тонкое шлифован­ное предметное стекло. По крайней мере, одно ребро таких стёкол должно быть уже ширины того пред­метного стекла, на котором приготовляют мазок. Обычно это достигается подбором или обламыванием углов шлифованного стекла.


Рис. 1. Приготовление мазка крови.


Поверхностью предметного стекла, зажатого в ле­вой руке, осторожно, но быстро касаются выступив­шей из прокола капли крови, стараясь сделать это ближе к среднему пальцу и, сейчас же, приведя стек­ло в горизонтальное положение, прикладывают к его поверхности узкое ребро того стекла, которое держат в правой руке. Приложенное ребро должно лежать перпендикулярно к длинным граням предметного отекла, а самое приложенное стекло нужно наклонить в сторону капли под углом в 40—50°. Держа это стек­ло, таким образом, осторожно двигают его в сторону капли до соприкосновения с нею. Как только капля, коснувшись подвижного стекла, разойдётся по линии соприкосновения стёкол, верхнее наклонное стекло быстрым, но ровным движением направляют обратно, в сторону большого пальца, сохраняя всё время преж­ний угол наклона в 40—50°. Полученный таким спо­собом мазок высушивают на воздухе и на нём пи­шут иглой название или номер животного, его пол ((J или Q), и дату взятия крови.

Можно изготовлять мазки и на покровных стёк­лах. Для этого одним покровным стеклом берут очень маленькую каплю крови и прикладывают к нему другое покровное стекло так, чтобы углы одно­го стекла легли на середину рёбер другого. Как только капля крови разойдётся тончайшим слоем между обоими стёклами, последние параллельным

движением в противоположные стороны разводятся, и, таким образом, получаются два мазка.


В. ФИКСАЦИЯ МАЗКА


Чтобы закрепить все форменные элементы крови в препарате с максимально возможным сохранением их структуры и подготовить мазки к последующей окраске, существуют различные методы фиксации мазков. Наибольшее практическое значение имеют:

1. Фиксация абсолютным метиловым спиртом. Это лучший метод фиксации. Сухие мазки на 3 ми­нуты погружаются в абсолютный метиловый спирт или на то же время спирт наливается на мазок, вполне покрывая препарат. Через 3 минуты мазки вынимают (или сливают с них спирт) и просушивают на воздухе.

2. Фиксация абсолютным этиловым спиртом, смешанным с равным количеством эфира. Фиксация длится 10—30 минут в обычных сосудах для гистологических растворов. Этот способ значительно хуже, так как даёт много артефактов.


В. ОКРАСКА МАЗКА. ОСНОВНОЙ МЕТОД ОКРАСКИ ПО РОМАНОВСКОМУ


Посредством окраски препарата наиболее отчетливо выявляется тончайшая структура, как ядра, так и цитоплазмы. Принцип современных методов окраски мазков крови открыт в 1891 г. Д. Л. Романовским и заключается в избирательном поглощении (химическом и коллоидальнохимическом) веществами клетки трёх красящих веществ — азура метиленовой синьки и эозина. Азур («красная из метиленовой синьки») имеет амфотерноосновную ре­акцию, метиленовая синька — щелочную, эозин — кислую.

Ядро клетки, богатое нуклеопротеидами и нуклеотидами, базофильно, т. е. окрашивается основными красками с избирательным поглощением а з у р а.

Цитоплазма молодых клеток, от­носительно богатая нуклеиновыми кислотами (нуклеотидами), также, хотя и в меньшей степени, базофильна. При этом избирательно погло­щается преимущественно метиленовая синь­ка. Цитоплазма же многих зрелых клеток крови (прежде всего нейтрофилов) ацидофильна (оксифильна).

Лимфоциты сохраняют базофилию цитоплазмы на всех стадиях развития, избирательно поглощая метиленовую синьку. Наличие базофилии молодой цитоплазмы, указывающее на относительное богатство её нуклеиновыми кислотами, связано с сохранением способности молодых клеток к интенсивному синтезу белков.

Лимфоциты сохраняют эту способность на весь онтогенез.

Базофилия гранул базофилов определяется наличием в них кислой слизи (мукоитиносерная кислота).

В лабораторной практике чаще всего пользуются следующими способами окраски по методу Романовского.


Окраска раствором Гимза


Краска Гимза, применяемая при окраске по ме­тоду Романовского, представляет собой комбинацию метилен-азура (азур II) и эозина (В, жёлтого). Она состоит из азура II*—3,0, эозина В —0,8, хими­чески чистого глицерина 250,0 и метилового спирта 250,0.

Эта краска обычно отпускается готовой. Очень многое в успехе окрашивания определяет безупреч­ное качество раствора краски, а последнее в высшей степени зависит от реакции воды.

Для приготовления рабочего раствора краски употребляется дважды дистиллированная вода. Обыч­но она имеет рН=5,4, т. е. слишком кисла, и даёт слабую, плохую окраску. Поэтому такую воду нуж­но подщелочить, прибавив к 2—3 л воды несколько капель 1-процентного раствора соды. Лучшим рН воды следует считать 6,8—6,9 (до 7,1). При более щелочной реакции воды мазки получаются более синими (даже эритроциты).

Практически пригодность воды к окрас­ке определяют по растворению в ней гематоксилина. В 10 см3 дистиллированной воды (лучше всего в часовом стёклышке) кладут пинцетом несколько крупинок гематоксили­на. Не ранее как через 1 минуту и не позже 5 минут вода должна окраситься в ясный слабофиолетовый цвет. Более раннее и интенсивное окрашивание ука­зывает на сильно щелочную реакцию, более позд­нее — на кислую.

Если нет очень хорошего гематоксилина, то реак­цию воды, подщелачиваемой раствором соды, можно определить, пользуясь в качестве индикатора ней­тральной красной. В два химических стакана (или кол­бы Эрленмейера) наливают по 200 см3 дистиллированной воды и прибавляют 1 — 2 капли 1-процентного раствора нейтральной красной. При рН дистиллированной воды, равном 5,4—5,5, получается свекловично-красная (рубиновая) окраска. После этого в один из стаканов прибавляют по капле, тщательно разме­шивая, 1% раствор соды до появления слабого оранжевого оттенка (цвет лососины). Нельзя доводить воду до ясно оранжевого и, тем более, жёл­того цвета, так как в этом случае реакция будет сильно щелочной.

Более кропотливо пользоваться индикаторами Михаэлиса и менее точно — универсальным индикатором.

Лучше всего для получения нужной и стойкой реакции воды применять буферные рас­творы. Хорошими буферными растворами для этой цели будут фосфатные. Для них нужно иметь два исходных раствора:

1. Двуосновного фосфата натрия (Na2HP04. •2Н20)—17,814 г на 1 л (рН =8,302).

2. Одноосновного фосфата калия (КН2Р04) — 13,638 г на 1 л (рН =4,529).

Азур II — смесь в равных частях красок: азур I (диметилтиониохлорид) и метиленовой синьки. В постарев­шем растворе исходной краски Гимза метиленовая синька часто плохо окрашивает цитоплазму лимфоцитов (нет чисто голубого цвета). Тогда необходимо добавить метилено­вой синьки в исходный раствор краски.

Если к литру дистиллированной воды прибавить по 5 см3 того и другого раствора, то рН такой воды будет равен 6,813. Случайные колебания концентра­ции углекислоты в воздухе при таком способе не ока­зывают влияния на рН воды.

Перед окраской (ex tempore) к дистиллированной воде прибавляют исходный раствор краски Гимза из расчёта 1,0—1,5 капли краски на 1 см3 воды.

Рабочий раствор краски наливается пипеткой (ос­торожно!) на предметное стекло так, чтобы препарат (мазок крови) был полностью покрыт краской. Стёк­ла помещаются над широкой чашкой Петри на стек­лянных палочках, соединённых резиновыми трубками попарно. Во избежание осадков, которые невозможно отмыть, можно стёкла укладывать мазками вниз, на стеклянные палочки, лежащие в чашке Петри, так, чтобы краска покрывала мазки полностью (способ академика Н. Д. Стражеско).

При первом способе на один мазок тратится 2,5— 3,0 см3 рабочего раствора краски.

Через 20—30 минут краску сливают, препараты промывают водопроводной чистой водой и высуши­вают на воздухе. Для окраски старой краской тре­буется меньше времени.

При окраске раствором Гимза хорошо дифференцируется структура ядра, несколько хуже — структура цитоплазмы, особенно нейтрофильная зернистость. Однако при очень умелом окрашивании и зернис­тость выявляется достаточно хорошо.

По этому методу плохо окрашиваются псевдоэозинофилы (палочкозернистые гранулоциты) крови сель­скохозяйственных птиц.

Окрашенные краской Гимза ядра имеют красивый фиолетово-красный цвет (цвет вишни); нейтрофиль­ная зернистость — розовато-фиолетовый; эозинофильная зернистость — розовый или красно-розовый; базофильная —цвета мальвы; азурофильная — красно-фиолетового цвета.

Цитоплазма лимфоцитов — голу­бая, моноцитов — от голубовато-серой до пепельно-серой.

Эритроциты — красновато-розового цвета, полихроматофилъные эритроциты — синеватые, базофильная пунктация эритроцитов — синяя.

Если нет хорошей готовой краски Гимза, то можно хорошо окрасить мазки по Н о х т у. Для окраски по Нохту приготовляется два раствора: 1) 1-промил-льный раствор азура II; 2) 1-промилльный раствор эозина. Перед приготовлением рабочего раствора кра­ску нужно оттитровать. Для этого сначала берут на 3 см3 дистиллированной воды 4 капли раствора азу­ра II и 3 капли раствора эозина (т. е. в отношении 4 : 3). Если окраска мазков неправильна, пробуют отношение 4 : 4, или 4 : 5, или 4 : 6, и т. д.

Достаточно интенсивное окрашивание получается, если на 1,5 см3 азура II берётся 1,0 см3 эозина и 6 см3 воды.

Модификация Паппенгейма (Май-Грюнвальд — Гимза)

При этом способе окраски предварительная фик­сация мазка не нужна, так как первая краска — Май-Грюнвальд имеет растворителем метиловый спирт.

Метод окраски двухмоментный. Сперва мазок по­крывают 2 см3 неразведённой краски

Май-Грюнвальд, представляющей собой раствор в метиловом спирте эозина и метиленовой синьки. Если нет гото­вой надёжной краски, то растворяют приготовленный фабричным способом сухой порошок Май-Грюнвальд: 1,0 г порошка на 100 см3 абсолютного метилового спирта и 50 см3 чистого глицерина. Хорошая крас­ка получается и без глицерина.

Через 3 минуты к краске Май-Грюнвальд, находя­щейся на мазке, прибавляют 2 см3 дистиллированной воды и тщательно смешивают их продуванием или последовательным набиранием и выпусканием через тонко оттянутую пипетку. Когда, примерно через 1 минуту, мазок приобретает розовый оттенок, крас­ку с препарата сливают и после этого, не высуши­вая, 10—12—15 минут красят мазок рабочим рас­твором краски Гимза, а затем промывают чистой водопроводной водой. Этот способ окраски удачно сочетает хорошее выявление зернистости клеток кра­ской Май-Грюнвальд с чёткой окраской структуры ядра раствором Гимза.

Такая окраска особенно ценна для выявления псевдоэозинофилов (специальных гранулоцитов) ку­риной крови.

Результаты окраски: ядра красно-фиолетовые, ци­топлазма лимфоцитов голубовато-синяя, азурофильная зернистость лимфоцитов пурпурно-красная, миелоидная азурофилия фиолетово-коричневая, так же как и центральная субстанция кровяных пластинок. Нейтрофильная зернистость коричневато-красная, до синевато-розовой; эозинофильная — от красно-оранжевой до кирпично-красного цвета; базофильная зернистость тёмного ультрамариново-фиолето­вого цвета (метахромазия); эритроциты медно-розовые; полихроматофильные эритроциты синеватые; базофильная пунктация эритроцитов (слабо выявляе­мая) синего цвета *.

В целом, мазки, окрашенные по этому способу, несколько богаче оттенками, чем при окраске раство­ром Гимза, но кажутся более тёмными, «мрачными».

Цветные таблицы картин крови выполнены с препаратов крови, окрашенных по Романовскому в модификации Паппенгейма, лучше всего диференцирующей струк­туру клеток.


Ускоренная окраска раствором Гимза (новая модификация)


Этот метод даёт хорошие результаты только в ру­ках опытного исследователя. Преимущество — бы­строта приготовления препарата, так как фиксация и окрашивание происходят одновременно.

Для работы необходимы капельницы ёмкостью в 30 см3, в которые наливается исходный раствор краски Гимза, разведённый пополам метиловым спир­том или чистейшим ацетоном. В хорошо закупоренной склянке этот раствор может сохраняться месяцами.

Окрашивание производится или в чашках со спе­циальными перекладинками, или в обычных чашках Петри. На свежий мазок (не позднее 2-дневного!), высушенный на воздухе и не фиксированный, нали­вают из капельницы около 20 капель краски. Чтобы предохранить краску от испарения, чашка, в которой лежат препараты, закрывается стеклом.

Через 1/2 минуты — 1 минуту к краске на мазке приливают около 10 см3 подщелочённой дистиллированной воды (1—2 капли 1-процентного раствора щелочи на 50 см3 воды). Покачиванием чашечки хорошо перемешивают краску с подлитой водой. Через 10— 15 минут воду с краской сливают и мазок промывают водопроводной (недистиллированной!) водой.

В случае приготовления основного раствора с аце­тоном особенно хорошо выявляется зернистость структура ядер кровяные пластинки.

Описание цветов дано, с некоторыми небольшими изменением, по А. II. Крюкову.


Окраска крови и кровепаразитов по Г. Эпштейну


Фиксация метиловым спиртом

Готовят два раствора.

1-й: дистиллированной воды 100 см3; лимоннокислого лития — 1 г; толуидиновой голубой — 1г. По­сле разведения профильтровать.

2-й: насыщенный водный раствор пикриновой кислоты.

Мазки красят 20—30 минут в первом растворе и, ополоснув в проточной воде, помещают на 1—2 секунды во второй раствор (пикриновой кислоты). Промывают (тщательно!) снова в водопроводной воде и после этого быстро обсушивают фильтровальной бумагой.

Окраска: эритроциты зелёные; ядра лейкоцитов фиолетово-синие; базофильная зернистость вишнё­вая; эозинофильная зернистость изумрудно-зелёная; нейтрофильная зернистость серая; у кровепаразитов ядро красное, а цитоплазма синяя.


Окраска составом Лейшмана


На нефиксированный препарат налить 15—20 ка­пель готового раствора краски Лейшмана (0,1 г порошка краски растворить в 10 см3 метилового спирта). Через 2,5—3 минуты прибавить 30 капель дестиллированной воды и красить ещё 5 минут. Про­мыть в течение 2—3 минут проточной водой и высу­шить на воздухе.


Специальные способы окраски и фиксации мазка

а) Получение и окраска толстой капли. На хорошо промытое (подщелочённой водой, затем спиртом с эфиром) предметное стекло наносят 2 крупные капли крови. Собственно, достаточно одной капли, но вто­рая служит «резервом» на случай неосторожного сти­рания одной капли, неудачи окраски и т. д. Каждая капля сейчас же, с помощью иглы, распределяется по стеклу ровным слоем — примерно в 1\4 - 1\2 мм толщины, чтобы получились пятна размером с деся­тикопеечную монету. Препараты тщательно высуши­ваются (в термостате при 37° или на солнце) в течение получаса.

После этого высохший препарат дважды окраши­вают рабочим раствором Гимза (1 капля исходного спиртового раствора Гимза на 1 см3 дистиллирован­ной воды).

Первое окрашивание длится около 3 минут после того, как в растворе краски появится красное облачко растворившегося гемоглобина. Затем один конец предметного стекла слегка приподни­мают и старый раствор Гимза заменяют новым, при­ливая его очень осторожно с приподнятого конца препарата, в то время как прежний раствор краски с гемоглобином стекает с другого конца. Когда таким образом вся старая краска сменена новой, предмет­ное стекло снова устанавливают горизонтально и продолжают докрашивание ещё 25 минут.

Значение метода состоит в том, что в толстой капле удается обнаружить таких паразитов крови, которые находятся в ней в небольших количествах. Быстро устанавливается наличие или отсутствие эозинофилов и производится их подсчет их подсчёт.

То же самое в отношении базофильных эритроцитов.

б) Оксидазная и пероксидазиая реакции лейкоцитов. Оксидазная реакция основана на возникновении индофеноловой голубой краски при воздействии оки­сляющих ферментов на анафтол и диметилпарафенилендиамин; в местах локализации оксидаз в клетке возникает синее окрашивание.


Техника реакции состоит в следующем:


1. Фиксация мазка в смеси из 1 части 40-про­центного формальдегида и 9 частей 95-процентного спирта в продолжение нескольких секунд пли 40-процентного формальдегида и абсолютного алкоголя аа в продолжение 15—20 минут.

2. Окраска: а) 3 минуты слегка разведённым 1-процентным водным щелочным раствором анафтола (раствор приготовляется следующим образом: анафтол при нагревании в дестиллированной воде поднимается кверху и плавает в жидком виде; после введения в раствор кристалла едкой щёлочи анаф­тол растворяется в воде); б) не удаляя анафтола, на препарат наслаивают 1-процентный водный раствор диметилпарафенилендиамина. Через несколько ми­нут зернистость лейкоцитов, содержащая оксидазу, становится темносиней. Докрашивается препарат сильно разведённым раствором фуксина Циля.

Пероксидазная реакция.

а) Окраска по Край-биш в модификации Грэма. Хорошо высохший мазок в течение 10—15 минут фиксиро­вать жидкостью, состоящей из 1 части 40-процент­ного формалина и 9 частей 95-процентного спирта. После фиксации слегка промыть водой и покрыть раствором бензидина (приготовление: к 10 см3 40-процентного этилового спирта прибавляется не­сколько кристаллов бензидина +00,2 см3 3-процент­ной перекиси водорода). Окраска длится 5 минут. Затем смыть водой.

Места локализации пероксидаз окрашиваются сначала в сероватый, а затем в золотисто-коричне­вый цвет.

Последующее докрашивание — тионином, метиленовой синькой или краской Гимза.

б) Окраска по Сато. Воздушносухие маз­ки фиксируют в течение 30 секунд 1/2-процентным раствором медного купороса (CuS04) и затем окраши­вают бензидином с перекисью водорода (рецепт приготовления — как в предыдущем методе). Через 2 минуты препарат осторожно промывают дистил­лированной водой, на мазок наливают слой 1-процент­ного водного раствора сафранина, через 15—20 минут сафранин смывают водой и высушивают препарат на воздухе (избегать высушивания фильтровальной бу­магой!).

Пероксидазо-положительные гранулы окрашивают­ся в темносиний цвет, ядра — в красно-жёлтый; эритроциты не окрашиваются.

Посредством оксидазной и пероксидазной реакций облегчается диференциация миэлоидных клеток от лимфоидных. Обе реакции дают аналогичные резуль­таты, но оксидазная реакция более чувствительна.

Нейтрофилы и эозинофилы реагируют резко поло­жительно, базофилы так же, но только на ранних стадиях развития. Зрелые формы оксидазо-отрицательны. Однако ряд авторов считает, что и зрелые базофилы оксидазо-положительны.

Лимфоциты дают безусловно отрицательную реак­цию. Моноциты — иногда очень слабо положительную.

С клинической точки зрения представляет инте­рес тот факт, что при некоторых инфекционных забо­леваниях у нейтрофилов исчезают положительная оксидазная п пероксидазная реакции.

в) Окраска токсической зерни­стости раствором Гимза при рН =5,4. Токсическую зернистость, в отличие от обычной, нормальной зернистости гетерофилов (нейтрофилов), избирательно окрашивают, при окраске по принципу Романовского раствором краски Гимза, применяя буферный раствор с рН =5,4.

Буферный раствор:

Едкий натр (химически чистый) . 21,6 г

Уксусная кислота (химически чистая) .............. 27,0 »

Дистиллированная вода до.....1000,0 см3

Приготовление краски:

Исходной краски Гимза …………10см3

Дистиллигрованной воды ……….40 »

Буферного раствора до ………….100 »

Свежие мазки окрашивают в продолжение 1 часа, старые препараты — дольше (до 2 часов). Краска с мазка смывается буферным раствором и затем высу­шивается, как обычно.

При окрашивании препарат нужно класть на рас­твор краски мазком вниз.


Белые кровяные тельца – лейкоциты.


Лейкоциты (белые кровяные тельца) различаются между собой как морфологически, так и по биологи­ческой роли в организме. Будучи полноценными клетками, имеющими протоплазму и ядро, лейкоци­ты обладают отчётливо выраженной способностью к активному способу питания путём захвата и внут­риклеточного переваривания попадающих в кровь органических тел. Эта способность приобретает первостепенное биологическое значение в случае проникновения в организм патогенных мик­робов: пожирание их лейкоцитами — фагоци­тоз (Мечников, 1882—1893) — составляет важней­шее средство борьбы организма с инфекцией.

Наряду с фагоцитозом, весьма важное значение имеет образование лейкоцитами иммун­ных тел. У многих низших, а весьма возможно и высших животных особые лейкоциты выполняют также функцию переноса питательных веществ (трефоциты). Наконец, отдель­ные виды лейкоцитов (эозинофилы высших животных) способны обезвреживать токсины. Крупную роль лейкоциты играют в обмене веществ и в образовании так называемых трефонов — стимуляторов клеточ­ного роста, особенно в условиях регенерации тканей.

Структурные различия отдельных видов бе­лых кровяных телец изучены, начиная с работ П. Эрлиха (Р. Ehrlich, 1877—1898 гг.), достаточно хорошо. Значительно менее изучены их функцио­нальные особенности, их целлюлярная физиология. Несмотря на огромное количество работ, онтогенез белой крови полностью ещё не выяснен. Наконец, сложная нейро-гуморальная регуляция сосудистой и внесосудистой белой крови исследована в чрезвы­чайно малой степени. Мало данных имеется даже о длительности жизни белых кровяных телец. По не­которым авторам, она весьма невелика (3—4 дня).

Основным принципом современной классификации лейкоцитов является морфологический.

У различных сельскохозяйственных и лаборатор­ных животных один и тот же тип лейкоцитов (особен­но эозинофилы и нейтрофилы, или гетерофилы) имеет специфические отличия в структуре. Однако в главном структура каждого типа лейкоцитов у всех сельскохозяйственных животных весьма близка и поэтому целесообразно вначале дать их общее описание, без видовой дифференциации.

По структуре ядро эозинофилов близко к ядру нейтрофилов, но несколько бледнее и выглядит грубее, так как чередующиеся светлые (оксихроматин) и тёмные (базихроматин) участки ядра эозинофилов крупнее, чем у нейтрофилов.

По мере созревания клетки ядро эозинофильных лейкоцитов изменяется в том же направлении, что и нейтрофильных, т. е. ядерный жгут скручивается и утончается, сперва равномерно (юные и палочкоядерные формы),а затем отдельные участки (сегменты) почти перестают утончаться и остаются сравнитель­но толстыми, а находящиеся между ними — превра­щаются в "тончайшие нити (сегментоядерные фор­мы). Однако сегментация ядра эозинофилов выражена не очень резко. Очень частой, типичной формой яв­ляется 2-дольчатая форма ядра, причём дольки напо­минают формирующиеся и только что отрывающие­ся капли, обращенные друг к другу узкими концами, соединёнными перемычкой, или две груши, соединён­ные плодоножками. У овец полиморфность ядра эози­нофилов выражена сильнее. Хотя при некоторых болезнях можно наблюдать в крови изменение отношения между возрастными формами эозинофилов в сторону увеличения более молодых (палочкоядерных, юных и даже миэлоцитов. — «сдвиг ядра влево»), но, ввиду относительной малочисленности (3—10%) эозинофилов, учёт ядер­ного сдвига в лейкоцитарной формуле не произво­дится.

Эозинофилы имеют очень большое клиническое значение. Эозинофилы или исчезают из крови (анэо-винофилия), или уменьшаются в количестве (гипоэозинофилия), или, наконец, количество их резко нара­стает (гиперэозинофилия, или просто эозинофилия). Большинство инфекционных заболеваний в первом своём периоде связано с резким уменьшением коли­чества эозинофилов (гипоэозинофилия). Возврат эозинофилов в кровяное русло считают признаком ос­лабления болезни. При роже свиней и при многих инвазиях (особенно гельминтозах) наблюдается рез­кое увеличение эозинофилов (эозинофилия), доходя­щее у крупного рогатого скота до 40%. Эозинофилия встречается и при аллергических реакциях, причём здесь её связывают, так же как и при гельминтозах, с раздражением системы блуждающего нерва.

Функции эозинофилов недостаточно изучены.

Вероятна способность их зернистости к обезвре­живанию токсинов, а также участие зёрен в окисли­тельных процессах. Эозинофилы скопляются в ме­стах тканевой регенерации. Характерна локальная эовинофилия кишечника.







Чтобы не видеть здесь видео-рекламу достаточно стать зарегистрированным пользователем.
Чтобы не видеть никакую рекламу на сайте, нужно стать VIP-пользователем.
Это можно сделать совершенно бесплатно. Читайте подробности тут.