Лейкоцитоспермия в диагностике бактериальных инфекций (72701-1)

Посмотреть архив целиком

Лейкоцитоспермия в диагностике бактериальных инфекций

Сорокин Константин Владимирович

Введение

Лейкоцитоспермия, определяемая ВОЗ как концентрация лейкоцитов >1 млн/мл спермы, наблюдается приблизительно у 20% мужчин с бесплодием, но ее влияние на качество спермы не выяснено. В некоторых исследованиях выявлено отрицательное влияние лейкоцитоспермии на качество спермы, в других влияния не обнаружено или наблюдалось даже улучшение качества спермы [1-5]. В последних исследованиях показано, что активные формы кислорода, которые производятся, в частности, лейкоцитами, могут повредить ДНК сперматозоидов [6,7]. Это приводит к важным выводам: большинство мужчин, страдающих бесплодием, сдают сперму для искусственного оплодотворения, и необходимо избежать повреждения сперматозоидов и инфицирования яйцеклетки.

Происхождение лейкоцитов в эякуляте часто остается невыясненным. В основном, они происходят из придатка яичка, так как исчезают после вазэктомии [2], и появляются при инфицировании. Однако, у большинства мужчин, обратившихся в андрологическую клинику по поводу бесплодия, не наблюдалось проявлений инфекции (например, эпидидимита). Кроме того, наличие лейкоцитов слабо коррелирует с присутствием бактерий [8,9]. Бактериоспермия, которая предположительно связана с контаминацией, обнаруживалась более чем в 50% случаев [10] вне зависимости от лейкоцитоспермии. Дезинфекция кожи должна уменьшать количество ложноположительных посевов за счет исключения контаминации энтеральными бактериями [11]. Однако чувствительность определения патогенных бактерий в образцах спермы по критериям ВОЗ составляет лишь 20% [12].

Анализы спермы выполняются различными специалистами (андрологами, урологами, гинекологами, врачами-лаборантами), и критерии ВОЗ не всегда строго соблюдаются. Обычно вместо пероксидазной реакции для оценки количества лейкоцитов используют фазовую микроскопию, или же пероксидазную реакцию используют, если количество лейкоцитов превышает определенный уровень (например, 1 млн/мл). Однако этим достаточно простым методом подсчитываются не только все лейкоциты (гранулоциты, лимфоциты, макрофаги), но и другие круглые клетки, например, круглые сперматиды, сперматоциты, сперматоспоры и слущенный эпителий. Как показал Keel [13], исследовавший 500 американских клинических лабораторий, в большинстве их них не знают о различиях этих методов. 35% из этих лабораторий не были ознакомлены с инструкциями ВОЗ или даже не имели ни одного экземпляра руководства, в котором говорится о важности использования и распространения стандартных методов анализа спермы.

Так как вместо определения количества лейкоцитов с помощью реакций до сих пор широко распространен подсчет, цель данного исследования — изучить корреляцию между лейкоцитоспермией и присутствием в сперме бактерий, а, следовательно, определить диагностическую ценность подсчета лейкоцитов для определения бактериоспермии. Все анализы проводили строго по инструкциям ВОЗ.

Материалы и методы

Были обследованы 143 мужчины, обратившиеся в клинику андрологии для анализа спермы. Причиной обращения в клинику было бесплодие. Всех пациентов обследовали клинически, включая осмотр и пальпацию пениса, мошонки и простаты, а также тщательно собирали анамнез. Все пациенты сдавали сперму для анализа и посева. До сдачи анализа не должно было происходить эякуляции по крайней мере в течение 3-5 дней. Пациенты должны были помочиться перед сдачей анализа, а также вымыть пенис, мошонку и руки водой с мылом. Им выдавали широко открывающуюся пластиковую банку и просили принести сперму в лабораторию не позднее, чем через полчаса после эякуляции. Если это было невозможно, эякуляция происходила в специальной комнате в клинике. Все образцы спермы получали в результате мастурбации.

Анализ спермы проводил один специально обученный лаборант не позднее, чем через час после эякуляции. Анализ проводился полностью по инструкции ВОЗ [14]. Учитывали концентрацию сперматозоидов, рН семенной жидкости, содержание лейкоцитов и возраст пациента. pH измеряли при помощи индикаторных бумажных полосок фирмы Merck (Merck KGaA, 64271 Дармштадт, Германия) (рабочий интервал pH 6.5-10.0). Однако в дальнейшем анализировали только содержание лейкоцитов и наличие роста бактерий в посевах.

Подсчитывали все клетки (макрофаги, гранулоциты), не определяемые как половые клетки и их предшественники. Не использованы никаких специальные методы окраски, таких как пероксидазная реакция и т.п. Для определения морфологии клеток использовали предметные стекла марки Testsimplets; Waldeck GmbH, Мюнстер, Германия, окрашенные метиленовым синим или ацетатом крезолового фиолетового. Лаборант помещал каплю спермы на предметное стекло, выдерживал ее при комнатной температуре в течение 2 часов и рассматривал под увеличением в 600 раз.

Концентрацию лейкоцитов подсчитывали по инструкции ВОЗ:

N x S

Количество лейкоцитов

=


100

N — количество лейкоцитов в том же поле зрения, где находятся 100 сперматозоидов,

S — концентрация сперматозоидов (млн/мл). Подсчитывают не менее 200 лейкоцитов.

Наименьшее содержание лейкоцитов, определяемое этим методом — 3700 клеток/мл.

После анализа образцы спермы отправляли в отделение медицинской микробиологии для посева. Посев производили на экономически доступные агаровые среды. В дальнейшем анализировали только рост патогенных бактерий. Нормальную флору уретры не учитывали и включали в группу нормальной бактериальной флоры гениталий.

Статистический анализ производили при помощи статистического пакета программ для социальных наук (SPSS 10.0.7, SPSS.Inc. 1989-1999). Все демографические данные представлены медианой и 25-м и 75-м квартилями. Для определения диагностической ценности лейкоцитоспермии при выявлении роста бактерий вычисляли чувствительность, специфичность, положительное и отрицательное предсказательные значения (positive predictive value — PPV, negative predictive value — NPV), и отношение правдоподобия (likelihood ratio (LR)).

Таблица 1 — Результаты посевов спермы: произведен посев 143 образцов, взятых у мужчин с бесплодием. Определяли общее преобладание вида (в целом в двух группах), включая различные изоляты

Виды бактерий

Группа I

Группа II

Преобладание

Ureaplasma urealyticum

16

18

34/23.8

Enterococcus faecalis

15

9

24/16.8

Escherichia coli

4

6

10/7.0

Бета-гемолитический стрептококк

5

4

9/6.3

Prevotella sp.

3

6

9/6.3

Bacteroides sp.

4

2

6/4.2

Коагулазо-негативный стафилококк

3

2

5/3.5

Staphylococcus aureus

2

1

3/2.1

Enterobacter sp.

4

2

6/4.2

Streptococcus viridans sp.

0

2

2/1.4

Анаэробные бактерии

1

0

1/0.7

Mycoplasma sp.

1

0

1/0.7

Gardnerella sp.

1

0

1/0.7

Обозначение: группа I — нет лейкоцитов, группа II — присутствуют лейкоциты.

Таблица 2 — Количество изолятов патогенных бактерий

Количество изолятов

Группа I (n = 39)

Группа II (n = 34)

1

26

18

2

8

13

3

4

3

4

1

0

Обозначение: группа I — нет лейкоцитов, группа II — присутствуют лейкоциты.

Результаты

Из 143 образцов 81 не содержали лейкоцитов (группа I), а в 62 образцах лейкоциты были обнаружены (группа II). Медиана концентрации лейкоцитов в группе II составила 0,63 млн/мл (0,44-1,00 млн/мл). Проявлений инфекции (например, эпидидимита) не наблюдалось. Наиболее распространенными оказались следующие виды бактерий: Ureaplasma urealyticum (группа I: n = 16; группа II: n = 18), Enterococcus faecalis (группа I: n = 15; группа II: n = 9), Escherichia coli (группа I: n = 4; группа II: n = 6), бета-гемолитический стрептококк (группа I: n = 5; группа II: n = 4) и Prevotella sp. (группа I: n = 3; группа II: n = 6) (Таблица 1). Патогенные бактерии были обнаружены в 48,2% (39/81) образцов из группы I и в 54,8% (34/62) образцов из группы II. Нормальная бактериальная флора гениталий была обнаружена в 34 образцах из группы I и в 26 образцах из группы II, тогда как в 8 образцах группы I и в 2 образцах группы II роста флоры не было. Некоторые образцы содержали бактерии нескольких изолятов (Таблица 2).


Случайные файлы

Файл
103370.rtf
141556.rtf
131487.rtf
8766.rtf
53424.doc




Чтобы не видеть здесь видео-рекламу достаточно стать зарегистрированным пользователем.
Чтобы не видеть никакую рекламу на сайте, нужно стать VIP-пользователем.
Это можно сделать совершенно бесплатно. Читайте подробности тут.